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切片檢查對於許多病理的檢驗有很大的貢獻,OCT是一種切片的方法,下面就讓我來介紹吧。
冷凍切片有許多的優點:
1. 可以快速地做診斷
2. 可以用作脂肪的染色
3. 有些組織必須使用冷凍切片
4. 保有許多酵素活性與抗原活性
冷凍切片的流程為:
1. 樣本處理
2. 固定、包埋
3. 冷凍、切片
4. 染色
5. 封片
固定與包埋
1. 使用2%PFA(paraformaldehyde)固定10-20秒
2. PBS 洗5分鐘,3次
3. 5%果糖 10分鐘(4℃)
4. 10%果糖 10分鐘(4℃)
5. 20%果糖 10分鐘(4℃)
6. OCT/20% 果糖(1:2) overnight(4℃)
7. OCT包埋並放入-20℃冷凍
*OCT 是聚乙二醇與聚乙烯醇的混合物,目的是在支撐組織,減少皺褶與斷裂。不會在染色中增加背景訊號。
在室溫中為液體狀,低溫時就會變成固體狀。
切片流程:
1. 開機
2. 調整操作溫度
3. 將標本頭上抗凍潤滑油
4. 將OCT加在標本台上(作為底座)
5. 將標本放在標本台上
6. 再加入OCT
7. 將整個OCT標本塊切成方形
8. 將標本對在刀片上
9. 先粗切
10. 切薄片
11. 將薄片貼在玻片上
12. 關機(調成-10℃)
注意事項:
1. 腦、肝臟、甲狀腺容易碎裂,故可以提在-12℃,比較容易切出完整組織
2. 脂肪標本較難切片,需要將溫度調低一點(-25℃)
固定:
使用95%甲醇+5%冰醋酸溶液,10-20秒
去OCT:
37℃烤箱去掉OCT
封片:
封片膠通常為植物膠,加入xylene稀釋使用
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