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切片檢查對於許多病理的檢驗有很大的貢獻,OCT是一種切片的方法,下面就讓我來介紹吧。

冷凍切片有許多的優點:

1. 可以快速地做診斷

2. 可以用作脂肪的染色

3. 有些組織必須使用冷凍切片

4. 保有許多酵素活性與抗原活性

 

冷凍切片的流程為:

1. 樣本處理

2. 固定、包埋

3. 冷凍、切片

4. 染色

5. 封片

 

固定與包埋

1. 使用2%PFA(paraformaldehyde)固定10-20秒

2. PBS 洗5分鐘,3次

3. 5%果糖 10分鐘(4℃)

4. 10%果糖 10分鐘(4℃)

5. 20%果糖 10分鐘(4℃)

6. OCT/20% 果糖(1:2) overnight(4℃)

7. OCT包埋並放入-20℃冷凍

 

*OCT 是聚乙二醇與聚乙烯醇的混合物,目的是在支撐組織,減少皺褶與斷裂。不會在染色中增加背景訊號。

在室溫中為液體狀,低溫時就會變成固體狀。

 

切片流程:

1. 開機

2. 調整操作溫度

3. 將標本頭上抗凍潤滑油

4. 將OCT加在標本台上(作為底座)

5. 將標本放在標本台上

6. 再加入OCT

7. 將整個OCT標本塊切成方形

8. 將標本對在刀片上

9. 先粗切

10. 切薄片

11. 將薄片貼在玻片上

12. 關機(調成-10℃)

 

注意事項:

1. 腦、肝臟、甲狀腺容易碎裂,故可以提在-12℃,比較容易切出完整組織

2. 脂肪標本較難切片,需要將溫度調低一點(-25℃)

 

固定:

使用95%甲醇+5%冰醋酸溶液,10-20秒

去OCT:

37℃烤箱去掉OCT

 

封片:

封片膠通常為植物膠,加入xylene稀釋使用

 

 

 

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